1、250 μM Pb(NO3)2处理BY-2细胞10 h
2、250 μM Pb(NO3)2+0.5 μM SNP处理BY-2细胞10 h
3、250 μM Pb(NO3)2+100 μM cPTIO处理BY-2细胞10 h
4、0.5 μM SNP、100 μM cPTIO实时处理
本研究用250 μM Pb (NO3)2处理4日龄烟草BY-2细胞，立即用NMT测定Pb2+流速。250 μM Pb (NO3)2处理后，Pb2+内流速率恒定，平均值为70.40±2.70 pmol cm-2·s-1（图1A）。添加0.5 μM SNP后，Pb2+内流显著增加，达到160.56±32.83 pmol cm-2·s-1，显著增加128.06%。与单独Pb处理相比，100 μM cPTIO处理显著抑制了Pb2+的内流，甚至出现6.75±0.85 pmol cm-2·s-1的Pb2+净外排（图1A, B）。这些结果表明，在短时间内，SNP或cPTIO的存在显著改变了Pb (NO3)2处理下的的Pb2+流速。
图1. Pb胁迫下施用SNP和cPTIO前后NO对烟草BY-2细胞Pb2+流速的影响。正值代表Pb2+外排，负值代表Pb2+内流。
研究还测定了长期不同处理的细胞中Pb2+流速。如图2所示，单独Pb处理10 h时，烟草BY-2细胞内有Pb2+内流，其平均内流速率为34.94±2.98 pmol cm-2·s-1。添加SNP后，Pb2+平均流速显著增加，达到88.98±10.38 pmol cm-2·s-1。SNP存在时Pb2+流速的平均值约为单独Pb处理的2.55倍。然而， cPTIO处理下的细胞Pb2+外排速率最小，平均值为0.37±2.83 pmol cm-2·s-1。上述结果表明，NO增强了Pb2+向细胞内流入。
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图2. 不同处理10 h后NO对烟草BY-2细胞中Pb2+流速的影响。正值代表Pb2+外排，负值代表Pb2+内流。
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钙作为营养和信号分子，在植物的各种生命活动中发挥着重要作用。在这项工作中，NO促进了Pb2+的流入并参与了BY-2悬浮细胞对Pb的吸收。我们进一步检测了NO对Pb诱导的Ca2+流速变化的影响。如图3所示，对照细胞检测到Ca2+流入烟草BY-2细胞，其平均值为13.54±2.78 pmol cm-2·s-1
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